Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования

ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО РЫБОЛОВСТВУ ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ "МУРМАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ТЕХНИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ" Кафедра микробиологии ВИРУСОЛОГИЯ Методические указания для выполнения практических работ для студентов очной, вечерней формы обучения специальностей 020201.65 "Биология", очной и заочной форм обучения специальности020803.65 "Биоэкология" и очной формы обучения специальности 020209.65 "Микробиология" Мурманск, 2009 УДК 578 (076.5) ББК 28.3 я 73 В 52 Составители: А. Т. Перетрухина, д.б.н., профессор. И. В. Берестенникова, аспирант кафедры "Микробиология". Методические указания рассмотрены и одобрены кафедрой 17 декабря 2008г., протокол № 6 Рецензент - Е. Е. Лисицынская, доцент кафедры "Микробиология". ВВЕДЕНИЕ Предлагаемое методическое указание построено в соответствии с типовой рабочей программой и позволяет осуществить все основные работы, рекомендуемые типовой программой по дисциплине "Вирусология" для подготовки по специальностям 020201.65 "Биология", очной, вечерней формы обучения, 020803.65 "Биоэкология" очной и заочной форм обучения и очной формы обучения специальности 020209.65 "Микробиология". Методические указания предназначены для проведения студентами практических работ по дисциплине "Вирусология" для приобретения практических навыков работы в вирусологической лаборатории. Студент должен ознакомиться с набором биологических методов, применяемых в вирусологии - правилами стерильной работы с вирусами и клеточными культурами, способами приготовления культуры тканей, накопления и титрования, нейтрализации вирусов, поэтому методические указания включает задачи связанные с освоением препаратов, идентификацией вирусов, лабораторной диагностикой. Студент должен быть подготовлен для работы в различных областях вирусологии и микробиологии исходя из своих квалификационных возможностей, подготовлен к самостоятельной работе на должностях микробиолога, бактериолога, лаборанта-исследователя, инженера-исследователя, и других должностях, в соответствии с требованиями Квалификационного справочника должностей руководителей, специалистов и других служащих, утвержденных постановлением Минтруда РФ от 21.08.98 № 37. В методических указаниях представлены теоретические сведения о работе в вирусологической лаборатории, технике безопасности, работе с куриными эмбрионами, культуре тканей, культивирование и обнаружение вируса, а так же способы заражения куриных эмбрионов, культивирования вируса в культуре тканей, методы лабораторной диагностики и идентификации выделенных вирусов. Дисциплина "Вирусология" является обязательной для студентов специальностей 020209.65 "Микробиология", 020201.65 "Биология", 020803.65 "Биоэкология". . Практическая работа № 1 Устройство вирусологической лаборатории и её оборудование Цель работы - ознакомиться с устройством вирусологической лаборатории, её отделами, структурой, принципами работы и правилами поведения. Принципами асептики и антисептики, стерилизации, дезинфекции и пр. Теоретические сведения. Вирусы - возбудители болезней животных, растений, а также человека. Подобно другим инфекционным агентам они содержат ге­нетическую информацию в форме последовательности нуклеотидов в молекулах нуклеиновых кислот (ДНК или РНК), реализуют ее с помощью триплетного кода, обладают наследственностью и измен­чивостью, поддаются естественному и искусственному отбору. Но в отличие от других инфекционных агентов вирусы не имеют своего обмена веществ, и поэтому они ничем не питаются, не дышат и ниче­го не выделяют, у них нет белоксинтезирующих и энергообразую­щих систем. Вирусы размножаются только в живых клетках, поэто­му их можно рассматривать как биологические образования, несу­щие генетическую информацию, которую они реализуют только в живых клетках животных и растений. В хозяйствах промышленного типа широко распространены ос­трые респираторные и кишечные заболевания, вызываемые виру­сами парагриппа (парамиксовирусы), инфекционного ринотрахеита (герпесвирусы), вирусной диареи (флавивирусы), аденовирусами и др. Вирусы могут быть причиной внутриутробной патологии живот­ных. Так, парвовирус свиней, вирус чумы свиней часто вызывают мертворождение и мумификацию плодов, вирус инфекционного ринотрахеита - пороки развития, слепоту и т. д. Доказана роль виру­сов в возникновении опухолевых болезней (лейкозов, болезни Маре­ка и др.). Многие вирусные болезни животных опасны и для челове­ка (бешенство, вирусные энцефалиты, грипп, геморрагические лихо­радки и др.). Среди рациональных мер борьбы с вирусными болезнями ла­бораторная диагностика занимает ведущее место. ^ Вирусологические отделы. Вирусологические отделы лабора­торий и научно-исследовательских ветеринарных станций при­званы осуществлять лабораторную диагностику вирусных ин­фекций, контролировать заболеваемость животных, вызывае­мую вирусами в межэпизоотический период, а также учитывать состояние и напряженность специфического постинфекционного и поствакцинального противовирусного иммунитета, участвовать в организации и проведении профилактических мероприятий в борьбе с вирусными и хламидийными заболеваниями животных в обслужи­ваемом регионе. ^ Структура вирусологической лаборатории определяется за­дачами и особенностями ее деятельности. Размещать лаборато­рию желательно в двухэтажном здании или в изолированном от­секе. На первом этаже располагаются гардероб с индивидуаль­ными шкафами, санитарный пропускник, санитарные узлы, склад лабораторного оборудования, материалов и посуды, при­емник канализационных вод с установкой для их обезврежива­ния, виварии для здоровых и подопытных животных с вытяжны­ми шкафами, автоклавная и моечное помещение. Второй этаж отводят под лабораторные помещения: для культивирования культур клеток, для серологических и вирусологических иссле­дований, для аппаратуры, под термостатную, комнаты для заве­дующего лабораторией и сотрудников. Для организации даже небольшой диагностической лабора­тории используют изолированный отсек здания, состоящий не менее чем из 5 - 6 комнат. Под лабораторию отводят светлое помещение. Комнаты, где работают с вирусным материалом, должны быть хорошо осве­щены и состоять из двух отделений (предбоксника не менее 4 м2 и бокса не менее 9 м2), разделенных стеклянной перегородкой с дверью. В боксах лаборатории размещают только столы, стулья и принадлежности для работы. Поверхность столов покрывают стеклом, пластиком или нержавеющей сталью, а над рабочим местом устанавливают бактерицидные лампы типа БУВ-30, у входа в бокс кладут резиновый губчатый дезковрик, пропитан­ный дезраствором. В предбокснике держат стерильные халаты, шапочки, косынки, маски и тапочки, которые надевают перед работой в боксе, и размещают оборудование, соответствующее назначению бокса (термостат, микроскоп и инвертированный микроскоп, холодильник, водяную баню, центрифугу и пр.). Полы в комнатах лаборатории делают из плотного влагонепро­ницаемого, устойчивого к дезинфицирующим средствам мате­риала (метлахская плитка, пластик, линолеум), стены и потолки покрывают легко моющимся материалом - масляной краской или кафельной плиткой, окна заделывают сетками для предуп­реждения проникновения мух и других насекомых. Лабораторию (отдел) вирусологии обеспечивают холодной и горячей водой и вентиляцией с подачей стерильного воздуха. ^ Принцип работы. Для регистрации поступающего на исследование патологи­ческого материала предназначена приемная, где размещают не­сколько столов, обитых оцинкованной жестью, и емкости с дезинфи­цирующими растворами (3%-ным хлорамина, гидроксида натрия или 5%-ным фенола). В комнате для предварительной обработки материала (вскрывочной) вскрывают трупы и отбирают материал для даль­нейшего исследования. Выполняют это на специальном столе. Здесь же должны быть сосуды с дезинфицирующими раствора­ми, стеклянный шкаф для инструментария (ножницы, пинцеты, скальпели, корнцанги и др.) и стерильная посуда для сбора мате­риала, а также шкаф для спецодежды. Комнаты-боксы, предназначенные для вирусологических исследований, оборудуют в зависимости от назначения. В боксе для получения культуры клеток работать с вируссодержащим материалом запрещается Виварий (помещение для содержания лабораторных животных) должен иметь карантинное отделение, комнаты для здоровых и экс­периментальных животных, для мытья и дезинфекции клеток, для инвентаря и спецодежды, для приготовления кормов, кладовую, фу­ражную, трупосжигательную печь и др. Помещения для здоровых и экспериментальных животных должны быть изолированы друг от друга и иметь самостоятельные выходы. В автоклавной стерилизуют посуду, питательные среды, ап­паратуру, приборы, а так же обезвреживают инфекционный материал. Необходимо иметь два автоклава - для чистых материалов и для инфицированных, бак для сбора инфицированного материа­ла, сушильные шкафы, дистилляторы и шкафы для стерильной посуды. Моечная предназначена для мытья посуды, аппаратуры и приборов. В ней должны быть машины для мытья посуды и белья, сушильные шкафы и т. д. Посуду, пипетки и инструменты, за­грязненные инфицированным материалом, моют только после обез­вреживания. Рис. 1. Схема размещения оборудования: а—для работы с культурами клеток; б—для изготовления сред и растворов для культур клеток Лабораторные животные содержатся в клетках. На каждой клет­ке с животными вывешивают паспорт, где отмечают дату поступле­ния их в виварий, массу. В паспорте на клетках с подопытными жи­вотными дополнительно отмечают дату заражения и вид вируссодержащего материала, номер экспертизы и число зараженных жи­вотных. (рис. 1). Для вирусологической лаборатории любого типа обязательной частью оборудования должен быть настольный бокс или луч­ше бокс с ламинарной подачей воздуха. При выполнении не­сложных работ могут быть использованы стеклянные щиты, вмонти­рованные в столах так, чтобы отделить лицо работающего от матери­ала, которым он манипулирует. В планировке помещений лаборатории и в процессе проведения исследований важно предусмотреть следующие основные моменты: 1) обеспечить безопасность сотрудников; 2) предупредить контаминацию исследуемого материала микрофлорой; 3) предупредить вынос инфекции за пределы лаборатории. Эти три основных требова­ния следует помнить каждому, кто работает с вируссодержащим ма­териалом, и строго соблюдать режим работы вирусологической ла­боратории. ^ Режим работы вирусологической лаборатории. Весь персонал лаборатории проходит инструктаж и обучение безопасным ме­тодам труда, обеспечивается спецодеждой, спецобувью, сред­ствами санитарной защиты и защитными приспособлениями в соответствии с действующими нормами. Основные правила ра­боты в вирусологической лаборатории следующие: 1) вход в производственные помещения посторонних лиц, а также вход сотрудников в лабораторию без халата и сменной обуви категорически запрещен; 2) запрещено выходить за пределы лаборатории в халатах и спецобуви или надевать верхнюю одежду на халат, курить, при­нимать пищу в производственных помещениях и хранить в них продукты питания. В боксе работают в стерильном халате, мас­ке, шапочке, при необходимости надевают резиновые перчатки и очки. Обязательно меняют обувь. Не допускаются хождение, разговоры во время работы; 3) весь материал, поступающий в лабораторию на исследова­ние, должен рассматриваться как инфицированный. С инфекци­онным материалом нужно обращаться крайне осторожно, при распаковке его банки следует обтирать снаружи дезинфицирую­щим раствором и ставить их на поднос или в кюветы. Рабочее место на столе покрывают несколькими слоями марли, увлаж­ненной 5%-ным раствором хлорамина. Переливание жидкостей, содержащих вирусы, производят над кюветой с дезинфицирую­щим раствором. При работе с пипетками пользуются резиновы­ми грушами. Пипетки, предметные и покровные стекла и другую посуду, бывшую в употреблении, обеззараживают, погружая в 5%-ный раствор хлорамина, фенола, лизола или серной кисло­ты. Запрещено выносить из лаборатории оборудование, инвентарь, материалы и т. д. без предварительной дезинфекции их на месте; 4) по окончании работы рабочее место приводят в порядок и тщательно дезинфицируют. Вируссодержащий материал, необ­ходимый для дальнейшей работы, ставят на хранение в холо­дильник и опечатывают; 5) очень важное значение имеет тщательная и прочная марки­ровка посуды, содержащей инфекционный материал. Руки в перчатках промывают 5%-ным раствором хлорамина, затем перчатки сни­мают и обеззараживают вторично, дезинфицируют и моют. В случае попадания заразного материала на халат, руки, стол, обувь и т. д. надо сообщить об этом заведующему лабораторией (в учебных заве­дениях - преподавателю) и немедленно произвести под его контро­лем дезинфекцию. При подозрении в заражении необходимо обра­титься к врачу. При работе в вирусологической лаборатории сотрудники должны строго соблюдать методы и правила асептики и антисептики. Асептика - система мероприятий и приемов работы, пре­дупреждающих попадание микроорганизмов и вирусов из окружаю­щей среды в организм человека, а также в исследуемый материал. Она предусматривает использование стерильных инструментов и материалов, обработку рук сотрудников, соблюдение особых санитарно-гигиенических правил и приемов работы. Антисептика - комплекс мероприятий, направленных на уничтожение микроорганизмов и вирусов, способных вызвать ин­фекционный процесс при попадании на поврежденные или интактные участки кожи и слизистых оболочек. В качестве антисептиков используют различные химические вещества: 70%-ный этиловый спирт, 5%-ный спиртовой раствор йода, 0,5 - 3%-ный раствор хлорамина, 0,1%-ный раствор перманганата калия, 0,5 - 1%-ный раствор формалина, 1 - 2%-ные спиртовые растворы метиленового синего или бриллиантового зеленого. Дезинфекция - обеззараживание объектов окружающей среды путем уничтожения патогенных для человека и животных микроорганизмов и вирусов физическими способами и с помощью химических веществ: растворами хлорной извести (0,1 - 10%-ным), формалина, хлорамина (0,5 - 5%-ным), фенола (3 - 5%-ным), лизола (3 - 5%-ным), едкой щелочи (2 - 3%-ным) и др. Выбор дезинфици­рующего вещества и его концентрации зависит от материала, подле­жащего дезинфекции. В лабораториях для дезинфекции боксов чаще всего применяют пары формалина (30 - 35 мл 40%-ного раствора формальдегида на 1 м3 помещения), бета-пропиолактон (1,1 л на 100 м3 помещения) или испаряют карболовую кислоту (не реже одного раза в неделю) и ежедневно делают влажную уборку с применением растворов хлор­амина, гидроксида натрия и др. Стерилизация - обеспложивание, т. е. полное уничтоже­ние микроорганизмов и вирусов в различных материалах. Стерили­зацию проводят физическими (воздействием высокой температуры, путем ультрафиолетового облучения, фильтрацией жидкостей через бактериальные фильтры) и химическими методами. Физические методы стерилизации: а) прокаливание в пламени спиртовки или горелки. Данный способ применяют для стерилизации препаровальных игл, петель из аппарата Такачи, пинцетов, горловин культуральных сосудов и т. д.; б) стерилизация кипячением. Этим методом стерилизуют шпри­цы, мелкий хирургический инструмент, предметные и покровные стекла и другие предметы. Кипятят не менее 30 мин. Однако данный метод не обеспечивает полной стерилизации, так как некоторые ви­русы, например вирус гепатита, и споры бактерий могут остаться при этом жизнеспособными; в) стерилизация сухим жаром в сушильном шкафу. Метод ос­нован на действии нагретого до 165 - 180°С воздуха. Сухим жа­ром стерилизуют стеклянную посуду; г) стерилизация в автоклаве паром под давлением. Это один из наиболее эффективных методов стерилизации, поэтому он широко применяется; д) стерилизация в аппарате Коха или автоклаве текучим па­ром [давление 100 - 150 кПа (1 - 1,5 ат), экспозиция 30 мин]. При­меняют для стерилизации материалов, не выдерживающих воз­действия высокой температуры, например питательных сред с витаминами и углеводами; е) стерилизация ультрафиолетовыми лучами. Метод основан на бактерицидном действии УФ-лучей с длиной волны 260 - 300 мкм. Для стерилизации воздуха в боксах используют лампы БУВ-15, БУВ-30. Обычно облучение проводят 1 - 2 ч; ж) фильтрование жидкостей через бактериальные фильтры. Этим методом пользуются для освобождения питательных сред, сыворотки крови, витаминов и т. д. от бактерий, но не от виру­сов. Химический метод стерилизации. При этом методе использу­ют различные химические вещества. Учет, этикетировка и хранение вирусов в лаборатории. Для всех вирусологических лабораторий установлен единый поря­док обращения с вирусами, предусматривающий правила их хранения, регистрации, передачи внутри лаборатории и за ее пределы. Вируссодержащие материалы в пробирках, флаконах и дру­гих сосудах должны быть непременно снабжены этикеткой, на которой указаны вирус, штамм, дата получения, номер пассажа, объем и другие сведения. Данные этикеток должны полностью соответствовать записям в журнале штаммов лаборатории. Штаммы вирусов хранят в холодильнике под замком с пломбой или печатью. Вирусы выделенных штаммов, как и стандартных, необходимых для сравнения и серологических исследований, следует хранить в условиях, обеспечивающих их максимально длительную жизнеспособность. Основные методы консервации вирусов. Применяют следую­щие методы консервация вирусов: 1) при хранении вирусного материала (кусочки органов или тканей) часто используют глицерин (50%-ный раствор на физио­логическом растворе), который обладает бактериостатическим действием и в то же время защищает вирусы. В этом случае вирус можно хранить при 4 °С несколько месяцев; 2) чаще всего вирусы хранят в холодильниках, обеспечиваю­щих температуру минус 20, минус 30, минус 70 °С. При этой тем­пературе некоторые вирусы без добавки защитных веществ срав­нительно быстро теряют инфекционность. Известно, что чем меньше белка в вируссодержащей взвеси, тем меньше стабиль­ность вирусов, поэтому очищенные вирусы быстро теряют свою биологическую активность. Хорошее защитное действие при замораживании и хранении вирусов оказывает добавка одного из следующих компонентов: инактивированной сыворотки крови, обезжиренного молока (от 10 до 30 %), желатина (0,5 - 1,5 %), ДМСО (10 %) и др. При быстром замораживании вируса до минус 196 °С (жид­кий азот) с последующим хранением при этой температуре титр вируса в течение нескольких месяцев не снижается. Вирусы, чувствительные к низким значениям рН, следует замора­живать в жидкостях, не содержащих однозамещенных фосфатов (NaH2PO4 или КН2РО4), которые обладают кислой реакцией и имеют более низкую точку замерзания, чем двузамещенные фосфаты (NaНРО4 или К2НРО4) с щелочной реакцией. Скорость оттаивания вируса существенно не влияет на его актив­ность. Размораживать вирусы можно как при комнатной температу­ре, так и в водяной бане при температуре 37 °С. Во избежание часто­го замораживания и оттаивания одного и того же вирус содержащего материала необходимо хранить его маленькими порциями, достаточ­ными для одноразового титрования или использования, например для реакции нейтрализации; 3) лиофилизация, т. е. высушивание в замороженном состоя­нии в условиях вакуума, очень хороший способ консервирования вирусов. Для лиофилизации необходимы соответствующая аппара­тура, определенный (в зависимости от вида вируса) наполнитель и тщательное выполнение процедуры сушки. На стойкость лиофилизированного вируса влияет не только выбор соответствующего на­полнителя, но и состав газа в ампуле и температура хранения лиофилизата - не выше 4°С. Лиофилизацию лучше проводить в учреждениях, хорошо знакомых с этой методикой. В лиофилизированном виде вирусы мо­гут храниться несколько лет. Вирусологическая лаборатория должна иметь следующую документацию: журнал вирусологических исследований (экспертиз, сельхозучета, формы № 13-вет); журнал учета зараженных животных; журнал учета выделенных вирусов и их уничтожения; журнал учета движения производственных или музейных штаммов и другие книги учета согласно утвержденной инструк­ции. Оборудование вирусологической лаборатории. Количество и характер необходимого лабораторного оборудования определяются применяемыми методами исследований и объемом выполня­емой работы. В последние годы появилась возможность покупки многих вирусологических реагентов - антигенов, иммунных сывороток, культур тканей и сред для них. Употребление покупных реагентов не только экономит время лабораторного персонала, но и устраняет потребность во многих видах оборудования. В то время, когда писалась эта книга, в продаже появились вирусологические диагностические наборы (на­пример, для краснухи), что создает возможности диагностики вирус­ных заболеваний на базе самых небольших клинических лабора­торий. Многочисленные лабораторные методы могут быть сгруппированы в 4 категории в порядке их усложнения и увеличения соответствующих затрат: 1. Серологические методы 2. Серологические методы, включая реакцию нейтрализации в культурах тканей 3. Серологические методы (реакция нейтрализации на живот­ных). 4. Выделение и идентификация вируса. Если имеется в виду проведение только обычных типов серологических реакций, т. е. не требующих культур тканей или животных, обору­дование обычной серологической лаборатории будет достаточным (цент­рифуги для очистки сыворотки, штативы для серологических пробирок, водяные бани, холодильники, стеклянная посуда). Микро­методы делают возможным проведение серологических исследований да­же в небольшой лаборатории, так как они требуют незначительного количества реагентов, меньшего рабочего места и проще в постанов­ке. При диагностике вирусных инфекций обычно одновременно иссле­дуют не менее двух проб сыворотки (взятых в острой фазе и в период реконвалесценции) от одного больного, поэтому нужны специальные штативы или ящики (удобны стеллажи с металлическими выдвижными ящиками) для хранения ранних проб до того времени, когда будет взята последняя проба. Для реакций торможения гемагглютинации и связыва­ния комплемента нужны прозрачные пластмассовые пластины с лунка­ми, лампа и зеркало для чтения результатов, специальные петли для приготовления разведении, пипетки-капельницы, платформа-вибра­тор для смешивания реагентов в лунках и небольшой термостат на 37° С. Имеющиеся в продаже наборы антигенов и иммунных сывороток позволяют проводить исследования при наиболее часто встречающихся заболеваниях. Для расширения спектра исследований следует предус­мотреть возможность приготовления в лаборатории некоторых антиге­нов и иммунных сывороток. В этом случае потребуется дополнительное оборудование. 1. Для серологических исследований Весы для взвешивания компонентов солевых растворов. Весы аптечные для той же цели. Центрифуги с горизонтальными насадками. Комплект выдвижных ящиков со встроенными штативами для хране­ния сывороток или штативы для той же цели. Фильтры (Зейтва или Миллипор) для объемов 2 мл и больше. Стеклянная посуда (пробирки, колбы, пипетки и т. д.). Термостат на 37°С , маленький, для реакций, проводимых в микро­объемах. Лампа для чтения результатов реакций. Наборы для проведения реакций в микрообъемах (торможения гемагглютинации и связывания комплемента). Пластмассовые одноразовые пластины с лунками для реакций в микро­объемах. Автоматическая пипетка непрерывного действия. Пластмассовые пластины с лунками для проведения реакций тор­можения гемагглютинации и связывания комплемента в макро­объемах. Штативы серологические. Холодильники с температурой 4 - 6° С для сывороток, реагентов и т. д. Холодильник с температурой - 20°С для хранения антигенов. Платформы-вибраторы для смешивания компонентов при микроме­тодах. Водяная баня среднего размера, допускающая вариации температурной регулировки. Водяная баня малого размера с регулировкой от 56 до 65°С для инактивации. 2. Для серологических исследований, включая реакцию нейтрали­зации в тканевых культурах. Если предполагается использовать готовые культуры клеток и среды для них, отпадает необходимость в целом ряде предметов оборудования (клетки для животных, хирургический инструментарий и т. д.). В этом случае в дополнение к оборудованию, перечисленному в разделе 1 дан­ной таблицы, требуется следующее: Весы аналитические для приготовления растворов и питательных, сред для тканевых культур. Струевая горелка для запаивания ампул. Шприцы-пипетки с иглами и принадлежностями. Стеклянная (или пластмассовая) посуда для работы с тканевыми куль турами (пробирки, колбы, флаконы, чашки Петри). Защитные боксы (настольные или специальной конструкции). Термостат на 37°С для тканевых культур. Термостат с оборудованием для подачи углекислотно-воздушной смеси и поддержания заданной влажности. Магнитные смесители. Микроскоп бинокулярный. Микроскоп с нижним расположением объектива для работы с тканевы­ми культурами. Направляющие подставки для фиксации пробирок на предметном столике при микроскопировании. Штативы для пробирочных реакций. Штативы для пробирочных тканевых культур. Холодильник на -70° С для хранения вирусов. Ультразвуковой осциллятор для разрушения тканей (желательно). Вакуумный насос, малый. 3. Для приготовления антигенов и проведения реакции, нейтрализации на животных. В дополнение к оборудованию, перечисленному в разделах 1 и 2, требуется следующее: Помещение для животных. Клетки для животных. Центрифуга высокоскоростная, с устройством для ох­лаждения и создания вакуума в рабочей камере. Бормашина зубоврачебная для работы с куриными эмбрионами. Овоскоп для работы с яйцами. Инкубатор (термостат) на 37° С для содержания куриных эмбрионов до заражения. Инкубатор (термостат) для содержания зараженных куриных эмбрионов. Фарфоровые ступки и пестики. Хирургический инструментальный для взятия и обработки тканей для тка­невых культур. Набор игл для шприцев. Набор шприцев. Измельчитель тканей электрический. Колбы для трипсинизации тканей. Лампа ультрафиолетовая для стерилизации пластмассовой посуды. Смеситель-гомогечизатор. 4. Для выделения и идентификации вирусных и риккетсиозных агентов В дополнение к оборудованию, перечисленному в разделах 1, 2 и 3, требуется следующее: Криостатическая камера для изготовления срезов замороженных тканей, исследуемых с применением флюоресцентной микроскопии (желательно). Люминесцентный микроскоп. Холодильное оборудование на жидком азоте. Аппарат для вакуумного высушивания (желательно). Микротом для гистологических срезов (желательно). Вращающиеся барабаны для пробирок с тканевыми культурами. Автомат для обработки гистологических срезов (желательно). Серологические исследования с использованием культур тканей стоят на втором месте по доступности для вирусологической лаборатории (при условии, что список проводимых реакций и употребляемых типов ткане­вых культур ограничен). Стоимость исследований значительно возраста­ет, как только лаборатория переходит от использования таких сравни­тельно недорогих источников тканей, как цыплята, мыши, почки хомя­ков, человеческие эмбрионы, к применению перевиваемых клеточных линий и первичных культур ткани почек обезьян. Затраты возрастают также с усложнением методов исследований, которые могут варьировать от реакции нейтрализации с использованием феномена подавления мета­болизма (цветная проба) или однослойных тканевых культур до много­численных модификаций подавления бляшкообразования. Для проведе­ния этой работы требуется специальное оборудование - автоматические шприцы-пипетки, специальные виды стеклянной посуды, для подготовки клеток, магнитные мешалки, термостаты (в том числе оборудованные устройствами для создания углекислотной атмосферы и определенной влажности), специальные среды, холодильники для хранения вирусов (с применением сухого льда или механические, понижающие темпера­туру до - 70° С), специальные контейнеры с жидким азотом для хранения клеточных линий, и ряд другого оборудования. Так как работа должна проводиться с живыми (а следовательно, потенциально опасными) виру­сами, необходимы защитные боксы и боксовые комнаты для того, чтобы свести до минимума опасность заражения персонала. Если предполагается проведение реакции нейтрализации на живот­ных, следует предусмотреть возможности содержания животных и ухода за ними. Эти возможности должны быть большими по сравнению с тем, что требуется для лабораторий, где животные используются только для приготовления серологических антигенов и как источник тканей для культивирования. Чтобы хранить вирусные штаммы, нужен низкотемпе­ратурный холодильник (до - 70° С), а для пассирования вирусов на живот­ных потребуются шприцы, иглы к ним и секционный инструментарий.

Похожие:

	Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение... Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования		Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального... Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования
	Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение... Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования		Федеральное государственное автономное образовательное учреждение... Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования
	Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение... Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования		Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение... Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования
	Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение... Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования		Министерство образования и науки российской федерации федеральное... Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования
	Министерство образования и науки Российской Федерации Федеральное... Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования		Министерство образования и науки российской федерации федеральное... Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования