Инструкция по применению Подготовка препаратов




Скачать 89.18 Kb.
НазваниеИнструкция по применению Подготовка препаратов
Дата публикации23.02.2014
Размер89.18 Kb.
ТипИнструкция
litcey.ru > Химия > Инструкция


104941.doc

Page of






For Russia and CIS contact :

Liliane Meyer

www.nucleon.biz

E-mail : Lmeyer@nucleon.biz or admin@nucleon.biz

Mobile +41.79.257.13.85 or 41.22.534.95.26


Набор для скрининга (cytoactiv© screening set): Инструкция по применению
1.Подготовка препаратов
1) Препараты, окрашенные по Папаниколау: Удалить покровное стекло и среду для заливки, помещая препараты на лотке в кювету с ксилолом. Не снимайте покровное стекло с силой, его надо снимать осторожно!
Примечание: В зависимости от того, как долго препараты были закрыты покровными стеклами, может потребоваться их вымачивание в ксилоле от нескольких дней до недели в случае очень старых препаратов. Обесцвечивание препаратов не требуется.
^ 2) Нативные мазки: фиксировать мазки 20 минут в 96% этаноле и высушить их, защищая от пыли. Хранить мазки при комнатной температуре (17 – 27 °С).
3) Жидкостная цитология: приготовить монослойные препараты в соответствии с предложенным производителем протоколом.
^ 4) Гистологические срезы: Депарафинировать срезы, как обычно.
2. Восстановление антигена
1. Всегда наряду с окрашиваемыми препаратами используйте один препарат положительного контроля. Отметьте матовый конец передней стороны стекла с положительным контролем карандашом, чтобы проверять правильность его положения на последующих этапах.
2. Регидрировать мазки и положительный контроль, проведя их через возрастающий ряд спиртов: по 2 минуты в 96%, 70%, 50% спирте и, наконец, 2 минуты в Aqua dest. (дистиллированной воде).
3. Демаскировка антигенов: использование микроволновой печи или водяной бани
Микроволновая печь:

  • Поместите препараты в поднос, который установите в кювету, и залейте препараты цитратным буфером.

  • Доведите в микроволновой печи до кипения, не закрывая крышкой (3 – 4 мин при макс. мощности).

  • Закройте крышкой и продолжите кипячение при слабой мощности 20 минут.


Рекомендация: Через 10 минут снимите крышку и проверьте уровень буфера – при необходимости добавьте цитратный буфер. Снова закройте крышкой и продолжайте кипячение в микроволновой печи еще 10 минут. Препараты должны быть постоянно полностью покрыты буфером, чтобы они не высыхали во время кипячения

^ Водяная баня:.

  • Поместите препараты в поднос, который установите в кювету, и залейте препараты цитратным буфером.

  • Доведите до кипения на водяной бане, не закрывая крышкой.

  • Закройте крышкой и продолжите кипячение 20 минут.


4. Дайте препаратам остыть в цитратном буфере в течение 10 минут.
Стр. 2
 I. Иммунохимическое окрашивание
Важно:

Все этапы должны проходить при комнатной температуре (17 – 27 °С).
1. Поместите поднос с препаратами в кювету с промывным буфером. Промойте препараты 1 минуту в промывном буфере (руками поднимайте и опускайте поднос или поставьте кювету на качалку).
Выньте препараты из подноса и удалите излишки буфера, прикасаясь краями препаратов к фильтровальной бумаге. Поместите препараты на ровную, не адсорбирующую поверхность (например, лабораторный стол, стекло).
2. Нанесите на препарат 1 каплю антитела cytoactiv® (флакон с белой крышкой), покройте большим покровным стеклом одноразового использования и инкубируйте 30 минут при комнатной температуре (см. выше).
3. Аккуратно удалите покровные стекла и перенесите препараты в поднос. Поместите поднос с препаратами в кювету с промывным буфером. Промойте препараты 1 минуту в промывном буфере (руками поднимайте и опускайте поднос или поставьте кювету на качалку).
Выньте препараты из подноса и удалите излишки буфера, прикасаясь краями препаратов к фильтровальной бумаге. Поместите препараты на ровную, не адсорбирующую поверхность (например, лабораторный стол, стекло).
4. Нанесите на препарат 1 каплю детекторного реагента (флакон с желтой крышкой), покройте большим покровным стеклом одноразового использования и инкубируйте 10 минут при комнатной температуре (см. выше).
5. Аккуратно удалите покровные стекла и перенесите препараты в поднос. Поместите поднос с препаратами в кювету с промывным буфером. Промойте препараты 1 минуту в промывном буфере (руками поднимайте и опускайте поднос или поставьте кювету на качалку).
Выньте препараты из подноса и удалите излишки буфера, прикасаясь краями препаратов к фильтровальной бумаге. Поместите препараты на ровную, не адсорбирующую поверхность (например, лабораторный стол, стекло).

6. Добавьте 1 каплю хромогена (флакон с красной крышкой), покройте большим покровным стеклом одноразового использования и инкубируйте 5 минут при комнатной температуре (см. выше).
7. Аккуратно удалите покровные стекла и перенесите препараты в поднос. Поместите поднос с препаратами в кювету с дистиллированной водой. Промойте препараты 1 минуту в дистиллированной воде (руками поднимайте и опускайте поднос или поставьте кювету на качалку).
^ IV. Подкрашивание
8. Поместите поднос с препаратами в кювету с неразбавленным гематоксилином (например,

гематоксилином Майера) и подкрашивайте 10 сек.

Немедленно перенесите поднос с препаратами в кювету с водопроводной водой и проливайте

препараты проточной водой 3 – 5 минут (для их посинения).
Примечание: Результаты реакции окрашивания видны под микроскопом и без подкрашивания.

Само по себе подкрашивание позволяет выявлять морфологию клетки.
9. Закройте окрашенный препараты водорастворимой средой для заливки (Aquatex, Merck) и

покровными стеклами.
10. Оцените препараты под микроскопом. Мы рекомендуем микроскопию в светлом поле,

начиная с линз 4х или 10х. Сначала следует оценить положительный контроль. (См.

характеристики теста, стр. 3 «Оценка препаратов»).

Стр. 1
^ Набор для выявления HPV L1 высокого риска (cytoactiv© HPV L1 High risk set)
для иммунохимического выявления капсидного белка HPV L1 в цитологических и гистологических образцах
50 определений
^ Данные о продукте Код продукта: SCA0850
Содержимое набора:
Антитело к HPV L1 высокого риска cytoactiv® (готово к употреблению,

содержит < < 0,1% NaN3) 2,5 мл

Детекторный реагент (готов к употреблению) 2,5 мл

Хромоген (АЕС) (готов к употреблению) 2,5 мл

Положительный контроль 5 препаратов

Цитратный буфер раствор А* (* концентрат, разводить,

как указано ниже) 27 мл

Цитратный буфер раствор В* (* концентрат, разводить,

как указано ниже) 123 мл

Промывной буфер исходный раствор* (раствор PBS/Твин 20;

20-кратная концентрация (*концентрат, разводить,

как указано ниже) 125 мл

Инструкция 1 экземпляр
Дополнительные необходимые материалы, не входящие в состав набора:
Покровные стекла, пластмассовая кювета, микроволновая печь (или водяная баня), гематоксилин (гематоксилин Майера), водорастворимая среда для заливки (например Aquatex, Merck), Aqua dest, микроскоп.
Хранение реагентов:

Храните набор cytoactiv® и цитратный буфер в холодильнике (2 – 8 °С)

Храните промывной буфер при комнатной температуре (17 – 27 °С)

^

Разведение исходных реагентов для получения рабочих растворов




Цитратный буфер: Смешать исходные растворы А и В цитратного буфера


и довести водой до ^ 1,5 л. Хорошо перемешать и хранить при 2 – 8 °С.

Промывной буфер: Добавить к исходному раствору промывного буфера Aqua dest. до 2,5 л. Хорошо перемешать и хранить при 17 – 27 °С.

Стр. 2
^ Характеристики набора HPV L1 High risk:

Обоснование



Рак шейки матки вызывается вирусом папилломы человека (HPV), эпителиотропным опухолевым ДНК-вирусом. Известно большое количество типов HPV, инфицирующих аногенитальный тракт, но в злокачественных поражениях часто обнаруживается лишь один из подтипов. 9

L1, или главный капсидный белок, - один из восьми известных специфичных белков HPV (E1, E2, E4, E5, E6, E7, L1 и L2). В ходе вирусного жизненного цикла капсидный белок L1 (вместе с L2, малым капсидным белком) инкапсулирует вирусную ДНК, формируя новые инфекционные вирусные частицы, которые высвобождаются в верхний эпителиальный слой. 8

^

Цель применения



Антитело cytoactiv® HPV L1 High risk предназначено для выявления капсидного белка L1 вирусов папилломы человека на окрашенных по Папаниколау или нативных мазках шейки матки и парафиновых срезах тканей.

^

Клеточная локализация положительного сигнала



Капсидный белок L1 – ядерный белок, быстро транспортирующийся в ядро клетки после его синтеза в цитоплазме. Поэтому окрашивание ядра является специфичным окрашиванием. Кроме интенсивного окрашивания ядра иногда наблюдается везикулярное окрашивание цитоплазмы (окрашиваются синтезирующие капсидный белок L1 рибосомы). 1

^

Аналитическая специфичность



Антитело cytoactiv® HPV L1 High risk направлено против эпитопов капсидного белка L1, хорошо сохраняющихся у следующих вирусов папилломы человека высокого риска: HPV 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 56, 58.

^

Аналитическая чувствительность



Одно положительно окрашенное клеточное ядро.

Диагностическая специфичность



> 95 % при использовании цервикальных мазков без внутриэпителиальных поражений (Pap I; NIL).2

^

Диагностическая чувствительность



Около 80% при слабой или умеренной дисплазии (Pap III D; CIN I, CIN II)3

Около 25% при тяжелой дисплазии (Pap IVa; СIN III)3

< 5% при карциноме шейки матки (Pap V; > СIN III)4
Прогностическая релевантность выявления капсидного белка L1
При слабой или умеренной дисплазии с иммунохимически выявляемым капсидным белком L1 при последующем контроле показана ремиссия в 80 – 85% случаев. 5,6
При слабой или умеренной дисплазии без иммунохимически выявляемого капсидного белка L1 при последующем контроле показано прогрессирование примерно в 80% случаев. 5,6

^

Оценка препаратов с положительным контролем



Положительный контроль:
Окрашенные в красный цвет клетки означают положительную реакцию на капсидный белок L1 (30 – 50% всех клеток на стекле).

Примечание: Окрашивание более светлого красного цвета, чем можно ожидать на препаратах пациентов. Это объясняется разной природой клеток, используемых в качестве положительного контроля.

Литература


  1. 1.McMurray, HR.; Nguyen, D.; Westbrook, TF.; Mcance, DJ. : Biology of Human Papillomavirus. Int. J. Pathol. 2001, 82: 13-33

  2. Promer et al., 2004: Nachweis produktiver HPV-lnfektionen am zytologischen Routine-Abstrichpraparat.
    J. Fertil. Reprod. 4/2004

  3. Melsheimer et al., 2003 : Immunocytochemical detection of HPV High risk type L1 capsid protein in LSIL and HSIL as
    compared with detection of HPV L1 DMA. Acta cytologica, 47: 124-128

  4. Birner et al., 2001: Signal-amplified colorimetric in situ hybridisation for assessment of human papillomavirus infection in cervical
    lesions. Mod. Pathol. 14(7):702-9

  5. Griesser et al.; 2004 : Correlation of Immunochemical detection of HPV L1 capsid protein in Pap smears with regression of High
    risk positive mild/moderate dysplasia. AQCH, Vol. 26, No. 5: 241-245

  6. Griesser et al.: 2006, Immunochemical detection of HPV L1 capsid protein : a prognostic marker for early squamous lesions of
    the cervix uteri. Abstract Eurogin2006, Paris

  7. Griesser, H.; Sander, H.; Hilfrich, R.: HPV L1 capsid protein detection as prognostic marker for hr HPV associated early dysplastic
    lesions. Pathologica 2006, 98: 368




  1. zur Hausen, H.: Papillomaviruses and cancer: from basic studies to clinical application. Nat. Rev. Cancer 2002, 2: 342-350

  2. Munoz, N. ; Bosch, FX. ; de Sanjose, S. et al. : Epidemiologic classification of human papillomavirus types associated with
    cervical cancer. Engl. J. Med. 2003, 348: 518-527

cytoimmun diagnostics GmbH

* Delaware Avenue 1-3 * D-66953 Pirmasens * Tel +49 6331 1426 410 * Fax +49 6331 1426 411

www.cytoimmun.com 3.2008


Похожие:

Инструкция по применению Подготовка препаратов iconОписание и инструкция по применению cплавов благородных металлов...
Данная информация о продукции и инструкция по применению содержит специфические для данного продукта рекомендации по работе, а также...
Инструкция по применению Подготовка препаратов iconИнструкция №18/08-и по применению дезинфицирующего средства «Альфадез окси»
Инструкция предназначена для персонала лечебно-профилактических учреждений
Инструкция по применению Подготовка препаратов iconИнструкция №17/08-и по применению дезинфицирующего средства «Альфадез орто»
Инструкция предназначена для персонала лечебно-профилактических учреждений
Инструкция по применению Подготовка препаратов iconТиповая инструкция по применению и техническому обслуживанию огнетушителей...
Инструкция предназначена для применения энергетическими предприятиями
Инструкция по применению Подготовка препаратов iconИнструкция по применению
...
Инструкция по применению Подготовка препаратов iconСтр из Инструкция по применению мастики резинобитумной горячей ижора®...
Настоящая инструкция разработана для строительных, эксплуатационных и ремонтных подразделений
Инструкция по применению Подготовка препаратов iconИнструкция №11-3/572 от 05. 05. 2004 по применению средства «аниоксид...
Инструкция разработана в Научно-исследовательском институте дезинфектологии Министерства здравоохранения Российской Федерации
Инструкция по применению Подготовка препаратов iconИнструкция по применению fp-4000  Прием и хранение
Инструкция может быть использована как в случае промышленного использования присадки fp4000, так и в случае её испытаний
Инструкция по применению Подготовка препаратов iconНоу высшая школа Информационных Технологий
Теоретическая и практическая подготовка по применению базового функционала продуктов
Инструкция по применению Подготовка препаратов iconИнструкция по применению г. Москва

Вы можете разместить ссылку на наш сайт:
Школьные материалы


При копировании материала укажите ссылку © 2013
контакты
litcey.ru
Главная страница